線性范圍：0.62-40 ng/mL

1. 預(yù)期用途

本試劑盒設(shè)計(jì)用于定量檢測血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清、細(xì)胞裂解物等樣本中的待測物濃度，僅供研究使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

2. 檢測原理 

試劑盒采用競爭法原理：將合成半抗原包被于酶標(biāo)板上，同時(shí)加入樣品和抗體試劑（一抗），樣品中的待測物與半抗原上偶聯(lián)的待測物競爭結(jié)合抗體（一抗），結(jié)合形成“半抗原-抗體"免疫復(fù)合物，清洗去除游離的免疫復(fù)合物后，加入TMB顯色，樣本中待測物濃度越高藍(lán)色越淺，加入終止液，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物含量呈反比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中待測物的濃度。

3. 包含的實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料

如需單獨(dú)采購通用型組分，請?zhí)峁?yīng)的組分名稱。

4. 需要但未包含的實(shí)驗(yàn)材料

· 蒸餾水或去離子水，一次性離心管、一次性手套等耗材；

· 移液器、多通道移液器及配套槍頭；

· 燒杯、量筒、試劑瓶等容器具；

· 用于封貼微孔板的封板膜或其他替代材料；

· 微孔板振蕩器（如有需要）、離心機(jī)、旋渦振蕩器等輔助設(shè)備；

· 恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。

5. 試劑的準(zhǔn)備及儲存

· 1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。

· 1×通用稀釋液的配制：用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL的20×濃縮通用稀釋液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。

· 工作校準(zhǔn)品的配制：校準(zhǔn)品開封前應(yīng)離心30秒，確保所有校準(zhǔn)品集中于底部；

準(zhǔn)備7個(gè)離心管，將10×校準(zhǔn)品按需吸取一定量用“1×通用稀釋液"稀釋10倍配制成校準(zhǔn)品S1。例：50uL的10×校準(zhǔn)品+450uL的“1×通用稀釋液"，制備得到500μL的S1濃度校準(zhǔn)品。在隨后的6個(gè)離心管中分別加入250μL的“1×通用稀釋液"，在這6個(gè)試管中（S2~S7）將S1校準(zhǔn)品依次倍比稀釋6個(gè)梯度至S7，共配制7個(gè)濃度的校準(zhǔn)品，依次為：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下圖所示，“1×通用稀釋液"作為零濃度校準(zhǔn)品S0，共8支校準(zhǔn)品。

· 

6. 樣品采集、預(yù)處理及儲存

· 血清：使用血清采集管采集全血，室溫靜置待血細(xì)胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下離心15分鐘取得血清。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血清應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢測，如不能及時(shí)進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時(shí)間不超過6個(gè)月，樣品凍融不超過2次。

· 血漿：使用EDTA或肝素采血管收集血漿。全血采集后以1000×g離心15分鐘取得血漿。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血漿應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢測，如不能及時(shí)進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時(shí)間不超過6個(gè)月，樣品凍融不超過2次。

· 組織：組織稱重后剪碎，將剪碎的組織加入裂解液，一般按1:4-1:9的重量體積比，比如100mg的組織樣品對應(yīng)400uL的裂解液，具體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，最后將勻漿液于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

· 細(xì)胞：取適量細(xì)胞，于冰上進(jìn)行超聲破碎，5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

· 細(xì)胞上清：取細(xì)胞上清于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

7. 實(shí)驗(yàn)步驟

使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。

注意：酶標(biāo)板未恢復(fù)室溫前，請勿開封。

8.  結(jié)果計(jì)算

建議使用四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合：以濃度值為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)；

建議使用專業(yè)化軟件進(jìn)行結(jié)果擬合和計(jì)算，如ELISA CALC、SPSS、Graphpad Prism等。示例數(shù)據(jù)

以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

9. 檢測的局限性

樣本濃度超出檢測范圍上，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)后再次檢測，計(jì)算結(jié)果應(yīng)當(dāng)乘上稀釋倍數(shù)。樣本濃度低于LOQ定量，檢測結(jié)果無法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

10. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

以下結(jié)果基于校準(zhǔn)品的濃度值實(shí)驗(yàn)得出，未納入基質(zhì)效應(yīng)等其他因素的潛在影響。

靈敏度：0.38ng/mL。

精密度：板內(nèi)精密度CV＜10%（N=20），板間精密度CV＜15%（N=20）。

特異性（Analytical specificity）：其他相關(guān)因子在稀釋緩沖液中制備為10μg/mL測定，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。?

T4 ELISA檢測試劑盒 （酶聯(lián)免疫法）競爭法原理

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